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Interactive Co-Culture Plate (ICCP)
Indirect Co-Culture Plate
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Interactive Co-Culture Plate (ICCP)

혁신적 연구자를 위한 새로운 Indirect Co-Culture 배양용기

iccp 01.png

  • 일본 가나자와 의과대학의 Takeo Shimasaki 교수 : 개발 및 특허출원
  • 세포에서 분비된 인자가 용기 사이 필터를통과하는 수평이동형 indirect co-culture 배양용기
  • 배양 중 양쪽 용기 모두 용기밑면 세포관찰용이함.
  • 두 용기 모두 같은 재질 사용으로 다른 용기재질 사용으로 인한 영향을 최소화함.
  • 가운데 필터를 원하는 사양(구멍크기 및 밀도)을 구하여 끼울 수 있음.
  • 세포밀도가 높은 경우에도 분비인자의 용기간이동을 방해하지 않음.
  • 수직형 용기에 비해 높은 exosome 이동밀도

iccp-scheme.gif

ICCP (Interactive Co-Culture Plate)는 일본 가나자와 의과대학의 Takeo Shimasaki 교수(현 Ginrei Lab사장) 가 개발하고 특허출원함. 자신의 세포간 exosome연구에 활용할 목적으로 개발하였으며 외과의로서 췌장암의 항암제내성연구에 활용 중입니다.

ICCP는 Co-Culture방법 중 개별 용기에 종류가 다른 세포를 배양하는 Indirect Co-Culture를 위해 고안되었으며 각 세포로부터 분비된 인자가 상대편 세포에게 미친 영향을 평가할 수 있습니다. 양쪽 세포 모두 관찰가능합니다.


Indirect Co-Culture

Secreted soluble factor(exosome, cytokine, growth factor, etc)indirect-coculture.PNG




ICCP의 사용모습


ICCP에는 Well A, B 두 가지 모양의 용기가 있으며 각 용기에 A, B세포를 독립 배양합니다. iccp0101.png iccp0102.png
arrow.png
배양된WellA, B사이에 원하는 필터를 넣은 상태로 서로 ‘딸깍’ 끼워 조립 iccp0201.png iccp0202.png
arrow.png
연결된A-B세트는 400uL 이하로 배지를 넣으면 독립배양으로, 그 이상 넣으면 Co-Culture가 됩니다 . iccp0301.png iccp0302.png
arrow.png
슬라이드글래스 크기로 도립현미경으로 세포상태를 살필수 있습니다. iccp0401.png iccp0402.png
4개의 ICCP를 웰플레이프 크기의 어뎁터에 올려 라이브셀 도립현미경으로 관찰할 수 있습니다. iccp_adpater.png



ICCP의 장점 및 기존 수직형 Co-Culture Plate와의 비교


ICCP 기존 수직형 Co-Culture Plate
양쪽 웰 관찰
  • ICCP는 양쪽 웰을 모두 도립현미경으로 관찰 가능합니다.
  • 기존 수직형제품은 윗쪽 인서트필터의 세포는 관찰할 수 없습니다.
comp0101.PNG comp0102.PNG
양쪽 웰 관찰(면역형광)
  • 형광면역염색 후 원형커버슬립을 덮어 현미경 관찰합니다.
  • ICCP는 양쪽 웰을 관찰 가능합니다.
  • 기존 수직형제품은 윗쪽 인서트필터는 염색하기 어렵습니다.
comp0201.PNG comp0202a.PNGcomp0202b.PNG
동일용기 기질로 배양
  • 기질재질이 다른 경우 adherent 동물세포는 다른 배양환경에 있을수 있습니다.
  • ICCP양쪽 웰은 동일한 재질(PS)입니다.
  • 기존 수직형 용기는 인서트필터(Nylon)와 바닥용기(PS) 재질이 다릅니다.
comp0301.PNG comp0302.PNG
자유로운 필터 선택
  • ICCP는 웰 A,B를 서로 끼우는 구조로 사용자가 원하는 필터(구멍크기, 구멍밀도,재질, 두께)을 사용가능합니다.
  • 기존 수직형제품은 윗쪽 insert에필터가 용접된 형태로 기성품 선택의 폭이 좁습니다.
comp0401.PNG comp0402.PNG
필터통과밀도
  • ICCP는 필터에 세포가 자라지 않고 분비인자가 수평으로 통과하는 구조입니다.
  • 기존 수직형 제품은 분비인자가 수직으로 통과하는 구조로 윗쪽 insert에 세포가 과밀하게 자라면 필터구멍을 덮어 통과밀도가 줄어듭니다.
  • 한쪽 웰 또는 한쪽 insert에만 세포를 배양한 경우 반대편 웰 또는 아래 용기로 이동한 exosome밀도를 측정해 보니 ICCP는 67.2 x 107으로 수직형 제품은 32.7 x 107로 두 배정도 높았습니다.
comp0501.PNG comp0502.PNG
독립배양
  • ICCP는 웰 A, B에 각각 독립배양합니다.
  • 기존 수직형 제품은 insert에 세포를 배양하기 위해 바닥용기가 하나 더 필요합니다.
comp0601a.PNGcomp0601b.PNG comp0602a.PNGcomp0602b.PNG
세포회수
  • ICCP는 양쪽 웰을 동일한 방식으로 회수할 수 있습니다.
  • 기존수직형제품은 바닥용기 및 insert의 세포를 다른 방식으로 회수하며 insert 면적이 좁아 세포회수량에 차이가 발생합니다.
comp0701.PNG comp0702a.PNGcomp0702b.PNG
배양시간
웰 A : ePANC-1
CD63-GFP fusion 단백질을 발현하고 있는 PANC-1
웰 B : nrPANC-1
빨간 핵을 가진 PANC-1
도킹: co-culture시작 exo01.png
exo02a.jpg exo02b.jpg
배양 후 2일 exo04.png
exo03a.jpg exo03b.png

* CD63 : 엑소좀 표면항원


참고문헌
Biol. Pharm. Bull. 41, 1311-1321(2018) Takeo Shimasaki et.al Exosome Research and Co-Culture Study

제품
Cat.No. 특징

ICCP (Interactive Co-Culture Plate)

bubble_pack.png

2501-02AB

박스 당 10x 버블팩

아래는 버블팩의 내용물

Well A (PS) 2 EA
Well B (PS) 2 EA
Docking plate (PS) 1 EA
Cap (PP) 4 EA
Lid cover (LDPE) 4 EA
O-ring (VMQ) 1 EA

2501-AB01 1개 버블팩

ICCP Filter 0.6um 감마멸균필터

filter_pack.png

2525-06
  • 1통당 50개 필터
  • 구경 13mm
  • 재질 polycarbonate
  • pore size0.6um
  • 세포는 통과 못하며 엑소좀은 통과가능
  • 감마멸균완료

ICCP Filter 0.03um 감마멸균필터

filter_pack.png

2525-003
  • 1통당 50개 필터
  • 구경 13mm
  • 재질 polycarbonate
  • pore size 0.03um
  • 엑소좀은 통과 못하며 영양분만 통과가능
  • 감마멸균완료
ICCP Filter 0.6um & 0.03um 감마멸균필터 2525-06003C
2525-06   ICCP Filter 0.6um 1 EA
2525-003 ICCP Filter 0.03um 1 EA

ICCP Adaptor

iccp_adpater.png

2596-01 8개 ICCP를 넣을 수 있는 어뎁터
[Seoul]   #A-606B Woorim Lions Valley, 168 GasanDigital1-ro, Geumcheon-gu, Seoul, Korea 08507 / TEL:+82-2-2105-7020 /  FAX:+82-2-2105-7025 / email : info@philekorea.co.kr 
[Deajeon] MigunTechnoWorld 1-201, Techno2-ro, Yuseong-gu, Daejeon, Korea 34025 / TEL :+82-42-862-9636  /  FAX :+82-42-862-9638 / email : info@philekorea.co.kr